Norma sanitară veterinara din 15 februarie 2006

Capitolul IDispoziţii generale

Articolul 1

Prezenta norma sanitară veterinara stabileşte condiţiile de sănătate a animalelor ce guvernează miscarea ecvideelor între statele membre ale Uniunii Europene, denumite în continuare state membre, pe teritoriul României şi importul lor din tari terţe.

Articolul 2

În scopurile prezentei norme sanitare veterinare, se utilizează următoarele definiţii:

a)exploatatie - unitate agricolă sau de antrenament, grajd ori, în general, orice incinte sau amenajări în care sunt ţinute ori crescute în mod obişnuit ecvideele, indiferent de utilizare;

b)ecvidee - animale sălbatice sau domestice din specia ecvine (incluzând zebrele) sau asinii ori descendenţii incrucisarilor acestor specii;

c)ecvidee înregistrată - orice ecvidee înregistrată, astfel cum este definită de Directiva Consiliului 90/427/CEE , identificata prin intermediul unui document de identificare emis de autoritatea de creştere sau orice alta autoritate competentă a tarii de origine a animalului, care administrează cartea genealogica ori registrul pentru acea rasa de animale, sau orice asociaţie ori organizaţie internationala ce se ocupa de cai pentru competiţie sau curse;

d)ecvidee pentru tăiere - ecvidee destinate a fi transportate la abator pentru tăiere, fie direct, fie după tranzitul printr-o piaţa sau un centru autorizat de colectare;

e)ecvidee pentru reproducţie şi producţie - alte ecvidee decât cele menţionate la lit. c) şi d) ale prezentului articol;

f)stat membru sau ţara terta libera de pesta ecvina - orice stat membru sau ţara terta în care nu s-a detectat nici o evidenta clinica, serologica (la ecvideele nevaccinate) ori epidemiologica de pesta ecvina pe teritoriul în cauza în ultimii 2 ani şi în care nu s-au efectuat vaccinari împotriva bolii în ultimile 12 luni;

g)boli cu notificare obligatorie - bolile enumerate în anexa nr. 1;

h)medic veterinar oficial - medicul veterinar desemnat de autoritatea veterinara centrala a unui stat membru sau a unei tari terţe;

i)admitere temporară - statutul unui animal înregistrat, care este originar într-o ţara terta şi este admis pe teritoriul Comunităţii Europene pentru o perioadă mai mica de 90 de zile, ce va fi stabilită de Comisia Europeană în funcţie de situaţia sănătăţii animalelor din ţara de origine.

Capitolul IIReguli pentru miscarea ecvideelor

Articolul 3

(1)Autoritatea veterinara centrala a României trebuie să autorizeze miscarea ecvideelor înregistrate pe teritoriul sau sau sa trimită ecvidee către un alt stat membru doar dacă ele satisfac condiţiile stabilite de art. 4 şi 5. (2) Totuşi, autoritatea veterinara centrala a României ca stat de destinaţie poate acorda derogări generale sau limitate cu privire la transportul de ecvidee, care:

–sunt conduse călare sau dirijate, în scopuri sportive ori recreative, pe drumuri situate lângă frontierele interne ale Comunităţii Europene;

–iau parte la evenimentele culturale sau similare acestora ori la activităţi organizate de organismele locale autorizate, evenimente situate lângă granitele interne ale Comunităţii Europene;

–sunt destinate numai pasunatului sau muncii temporare lângă frontierele interne ale Comunităţii Europene.

(3)Dacă autoritatea veterinara centrala a României face uz de aceasta autorizare, ea trebuie să informeze Comisia Europeană asupra conţinutului derogarilor acordate.

Articolul 4

(1)Ecvideele nu trebuie să prezinte nici un semn clinic de boala la inspecţie. Inspecţia trebuie să fie efectuată cu 48 de ore înainte de imbarcarea sau încărcarea lor. În cazul ecvideelor înregistrate, aceasta inspecţie va fi totuşi solicitată numai pentru comerţul intracomunitar, fără să se prejudicieze prevederile art. 6. (2) Fără a prejudicia cerinţele alin. (5), referitoare la bolile cu notificare obligatorie, medicul veterinar oficial trebuie, în momentul inspecţiei, să fie convins de faptul că nu exista motive - în special pe baza declaraţiilor proprietarului sau crescatorului - pentru a concluziona ca ecvideele au venit în contact cu alte ecvidee care suferă de o boala infectioasa sau contagioasa, în decursul celor 15 zile dinaintea inspecţiei.

(3)Ecvideele nu trebuie să fie destinate tăierii în baza unui program naţional de eradicare a unei boli contagioase sau infectioase.

(4)Ecvideele trebuie să fie identificate în maniera următoare:

(i)în cazul căilor înregistraţi, prin intermediul unui document de identificare prevăzut de Directiva Consiliului 90/427/CEE (5), care trebuie să certifice în special ca au fost respectate prevederile art. 5 alin. (5) şi (6) din Directiva Consiliului 90/427/CEE . Medicul veterinar oficial va trebui sa suspende validitatea acestui document pentru perioada interdictiilor prevăzute la alin. (5) din prezentul articol sau la art. 5. După taierea căilor înregistraţi, documentul trebuie înapoiat autorităţii care l-a emis. Procedura pentru implementarea acestui punct va fi adoptată de Comisia Europeană în conformitate cu procedura comunitara;

(îi) în cazul ecvideelor pentru reproducţie şi producţie, printr-o metoda de identificare ce va fi stabilită de Comisia Europeană în conformitate cu procedura comunitara.

Până în momentul în care aceasta metoda va fi utilizata, metodele de identificare naţionale aprobate oficial trebuie să rămână aplicabile, cu condiţia ca acestea să fie notificate către Comisia Europeană în decursul a 3 luni de la data adoptării prezentei norme sanitare veterinare.

(5)În plus faţă de cerinţele stabilite de art. 5, ecvideele nu trebuie să provină dintr-o exploatatie care a fost supusă uneia dintre următoarele dispoziţii de interdicţie:

a)dacă nu au fost tăiate toate animalele din speciile sensibile la boala situate în exploatatie, perioada de interdicţie cu privire la exploatatia de origine trebuie să fie de cel puţin:

–6 luni în cazul ecvideelor suspecte de a fi contractat durina, începând cu data ultimului contact efectiv sau posibil cu un animal bolnav. Totuşi, în cazul unui armasar, interdicţia se va aplica până când animalul va fi castrat;

–6 luni în cazul morvei sau encefalomielitei ecvidee, începând din ziua în care sunt tăiate ecvideele care suferă de boala în cauza;

–în cazul anemiei infectioase, până la data la care, după ce animalele infectate au fost tăiate, animalele care au rămas au prezentat reactie negativa la doua teste Coggins efectuate la un interval de 3 luni;

–6 luni în cazul stomatitei veziculoase;

–o luna de la ultimul caz înregistrat, în cazul rabiei;

–15 zile de la ultimul caz înregistrat, în cazul antraxului;

b)dacă toate animalele din speciile sensibile la boala, existente în exploatatie, au fost tăiate, iar incintele au fost dezinfectate, perioada de interdicţie va fi de 30 de zile începând cu ziua în care animalele au fost distruse şi incintele dezinfectate, cu excepţia antraxului, când perioada de interdicţie este de 15 zile.

Autoritatea veterinara centrala a României poate acorda derogări de la aceste măsuri de interdicţie pentru hipodromuri şi piste de curse şi va informa Comisia Europeană referitor la natura oricăror derogări acordate.

(6)Dacă autoritatea veterinara centrala a României întocmeşte sau a întocmit un program de combatere voluntara sau obligatorie pentru o boala la care ecvideele sunt sensibile, aceasta poate prezenta programul Comisiei Europene, în termen de 6 luni de la notificarea prezentei norme sanitare veterinare, subliniind în special:

–distribuţia bolii pe teritoriul sau;

–motivele programului, luând în consideraţie importanţa bolii şi avantajele sale cost/beneficiu;

–zona geografică în care va fi implementat programul;

–categoriile de statut care vor fi aplicate unităţilor, standardele ce trebuie atinse pentru fiecare specie şi procedurile de testare ce vor fi utilizate;

–procedurile de monitorizare a programului;

–acţiunea care va fi întreprinsă în cazul în care, dintr-un motiv oarecare, o exploatatie îşi pierde statutul;

–măsurile ce vor fi luate dacă rezultatele testelor efectuate în concordanta cu prevederile programului sunt pozitive;

–natura nediscriminatorie a comerţului pe teritoriul respectiv cu privire la comerţul intracomunitar.

(7)Comisia Europeană va examina programele prezentate de autoritatea veterinara centrala a României.

(8)Atunci când este cazul, aceasta le va aproba în conformitate cu procedura comunitara. Orice garanţii suplimentare, generale sau specifice, care pot fi cerute, pot fi definite în conformitate cu aceeaşi procedura. Astfel de garanţii nu trebuie să le depăşească pe cele cerute de un stat membru pe teritoriul sau.

(9)Programele propuse de autoritatea veterinara centrala a României pot fi modificate sau suplimentate în conformitate cu procedura comunitara. Modificările sau suplimentarile acestor programe care au fost deja aprobate ori ale garanţiilor la care se referă alin. (2) pot fi aprobate în conformitate cu aceeaşi procedura.

Articolul 5

(1)Dacă un stat membru nu este indemn de pesta ecvina, în sensul art. 2 lit. f), poate expedia ecvidee din acea parte a teritoriului sau care este considerată a fi infectata, în sensul alin. (2) al prezentului articol, doar în condiţiile stabilite la alin. (3). (2) a) O parte din teritoriul unui stat membru va fi considerată ca fiind infectata cu pesta ecvina dacă:

–o evidenta clinica, serologica (la animalele nevaccinate) şi/sau epidemiologica a relevat prezenta pestei ecvine în ultimii 2 ani; sau

–s-a efectuat vaccinarea împotriva pestei ecvine în ultimele 12 luni.

b)Partea teritoriului considerată a fi infectata cu pesta ecvina trebuie să cuprindă cel puţin:

–o zona de protecţie cu o raza de minimum 100 km în jurul oricărui centru de infectie;

–o zona de supraveghere de cel puţin 50 km, care se extinde dincolo de zona de protecţie, în care nu s-a efectuat nici o vaccinare în ultimele 12 luni.

c)Regulile care controlează măsurile de combatere referitoare la teritoriile şi zonele menţionate la lit. a) şi b) şi derogarile relevante sunt specificate de Directiva Consiliului 92/35/CEE , transpusa în legislaţia naţionala prin Norma sanitară veterinara privind măsurile de control şi combatere a pestei africane a calului, aprobată prin Ordinul ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 497/2001, publicat în Monitorul Oficial al României, Partea I, nr. 186 din 19 martie 2002. d) Toate ecvideele vaccinate care se găsesc în zona de protecţie trebuie să fie înregistrate şi identificate în concordanta cu art. 6 alin. (1) din Directiva Consiliului 92/35/CEE , transpusa în legislaţia naţionala prin norma sanitară veterinara aprobată prin Ordinul ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 497/2001.

Documentul de identificare şi/sau certificatul de sănătate trebuie să poarte o menţiune clara referitoare la aceasta vaccinare.

(3)România poate expedia din teritoriul menţionat la alin. (2) lit. b) doar ecvidee care îndeplinesc următoarele cerinţe:

a)să fie expediate doar în anumite perioade ale anului ce vor fi stabilite de autoritatea veterinara centrala a României, avându-se în vedere activitatea insectelor vectori;

b)nu trebuie să prezinte nici un simptom clinic de pesta ecvina în ziua inspecţiei menţionate la art. 4 alin. (1);

c)dacă nu au fost vaccinate împotriva pestei ecvine, trebuie să fi fost supuse şi sa fi reactionat negativ la un test de fixare a complementului pentru pesta ecvina descris în anexa nr. 4, în doua randuri, la un interval de 21-30 de zile între cele doua teste, dintre care cel de-al doilea trebuie să fi fost efectuat în cursul a 10 zile înainte de expediere; dacă au fost vaccinate împotriva pestei ecvine, trebuie să nu fi fost vaccinate în ultimele doua luni şi trebuie să fi fost supuse testului de fixare descris în anexa nr. 4, la intervalele menţionate mai sus, fără să se fi înregistrat o creştere a titrului de anticorpi;

d)trebuie să fi fost ţinute într-o staţiune de carantina pentru o perioadă minima de 40 de zile înainte de expediere;

e)trebuie să fi fost protejate împotriva insectelor vectori pe perioada carantinei şi în cursul transportului de la statia de carantina la locul de expediere.

Articolul 6

(1)Dacă România şi alte state membre implementeaza un sistem de control alternativ ce asigura garanţii echivalente celor stabilite la art. 4 alin. (5), în ceea ce priveşte transportul pe teritoriul lor al ecvideelor şi al ecvideelor înregistrate, în special prin intermediul unui document de identificare, îşi pot garanta reciproc derogări de la prevederile art. 4 alin. (1) şi ale art. 8 alin. (1) lit. b).

(2)Părţile vor informa Comisia Europeană despre aceasta.

Articolul 7

(1)Ecvideele trebuie transportate cat mai curând posibil de la exploatatia de origine către locul de destinaţie, fie direct, fie printr-o piaţa sau un centru de colectare aprobat, astfel cum este definit la art. 2 alin. (2) lit. o) din Norma sanitară veterinara privind problemele de sănătate a animalelor, ce afectează comerţul României cu statele membre ale Uniunii Europene cu animale din speciile bovine şi porcine, aprobată prin Ordinul ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 236/2002, publicat în Monitorul Oficial al României, Partea I, nr. 835 din 20 noiembrie 2002, ce transpune în legislaţia naţionala Directiva Consiliului 64/432/CEE , în vehicule sau containere ce au fost curatate şi dezinfectate în mod regulat cu o substanţa dezinfectanta la intervale care vor fi stabilite de statul membru de expediere.

(2)Vehiculele trebuie să fie proiectate astfel încât dejectiile, asternutul sau furajele ecvideelor sa nu poată cădea din ele în cursul transportului. Transportul trebuie să fie efectuat astfel încât sănătatea şi bunăstarea ecvideelor să poată fi protejate eficient.

(3)Autoritatea veterinara centrala a României ca ţara de destinaţie poate acorda, în mod general sau limitat, o derogare de la unele cerinţe ale art. 4 alin. (5) pentru orice animal care poarta o marca specială care indica faptul ca este destinat tăierii, cu condiţia ca certificatul de sănătate sa menţioneze o astfel de derogare.

(4)În cazul acordării acestei derogări, ecvideele pentru tăiere trebuie să fie transportate direct la abatorul desemnat şi să fie tăiate în termen de 5 zile de la sosirea la abator.

(5)Medicul veterinar oficial trebuie să înregistreze numărul de identificare sau numărul documentului de identificare al animalului tăiat şi sa trimită autorităţii competente de la locul de expediere, la cererea acesteia din urma, o atestare a faptului ca animalul a fost tăiat.

Articolul 8

(1)Autoritatea veterinara centrala a României trebuie să se asigure ca:

a)ecvideele înregistrate, care părăsesc exploatatiile de pe teritoriul sau, sunt însoţite de documentul de identificare stabilit la art. 4 alin. (4), împreună cu - dacă sunt destinate comerţului intracomunitar - atestarea prevăzută în anexa nr. 2;

b)ecvideele pentru reproducţie, producţie şi tăiere sunt însoţite, în cursul transportului, de un certificat de sănătate care respecta prevederile anexei nr. 3. (2) Certificatul sau, în cazul unui document de identificare, formularul ce conţine particularităţile de sănătate ale animalului trebuie să fie întocmit, fără a prejudicia prevederile art. 6, în decursul celor 48 de ore anterioare imbarcarii lui sau nu mai târziu de ultima zi lucrătoare anterioară imbarcarii, în cel puţin una dintre limbile oficiale ale statelor membre de expediere şi de destinaţie. Durata valabilităţii certificatului este de 10 zile. Certificatul trebuie să fie constituit dintr-o singura fila.

(3)Importul de ecvidee, altele decât ecvideele înregistrate, poate fi însoţit de un singur certificat de sănătate pe lot în loc de certificatul individual menţionat la alin. (1) lit. b).

Articolul 9

Regulile stabilite în Norma sanitară veterinara privind controalele veterinare şi zootehnice aplicabile comerţului României cu statele membre ale Uniunii Europene cu unele animale vii şi produse de origine animala, aprobată prin Ordinul ministrului agriculturii, alimentaţiei şi pădurilor nr. 580/2002, publicat în Monitorul Oficial al României, Partea I, nr. 250 din 11 aprilie 2003, ce transpune în legislaţia naţionala Directiva Consiliului 90/425/CEE , se aplică în special controalelor la origine, organizării şi urmăririi controalelor ce vor fi efectuate de statul membru de destinaţie şi măsurilor de protecţie care trebuie să fie implementate.

Articolul 10

(1)Experţii veterinari ai Comisiei Europene, în cooperare cu autoritatea veterinara centrala a României, pot organiza inspecţii ad-hoc în România, pentru a se asigura de aplicarea uniforma a prevederilor prezentei norme sanitare veterinare. Comisia Europeană va informa autoritatea veterinara centrala a României despre rezultatele acestor inspecţii.

(2)Autoritatea veterinara competenţa centrala a României, ca ţara pe al carei teritoriu va fi efectuată inspecţia, va asigura experţilor tot sprijinul necesar pentru a-şi îndeplini sarcinile.

Capitolul IIIReguli pentru importul din tari terţe

Articolul 11

(1)Ecvideele importate în Comunitatea Europeană trebuie să satisfacă condiţiile stabilite de art. 12, 13, 14, 15 şi 16 din Directiva Consiliului 90/426/CEE , transpusa în legislaţia naţionala prin prezenta norma sanitară veterinara.

(2)Până la data intrării în vigoare a deciziilor adoptate conform art. 12, 13, 14, 15 şi 16, România va aplica importului de ecvidee din tari terţe condiţii cel puţin echivalente celor care rezultă din aplicarea cap. II al prezentei norme sanitare veterinare.

Articolul 12

(1)Importul ecvideelor în Comunitatea Europeană va fi autorizat doar din tari terţe care figurează pe o lista ce va fi întocmită sau modificată în conformitate cu procedura comunitara.

(2)Luând în consideraţie situaţia de sănătate şi garanţiile prevăzute de ţările terţe pentru ecvidee, poate fi decis, în conformitate cu procedura comunitara, ca autorizarea prevăzută de prezentul alineat să se aplice pentru întreg teritoriul tarii terţe sau numai unei părţi a teritoriului sau.

(3)În acest scop şi pe baza standardelor internaţionale relevante, se va tine cont de modul în care ţara terta aplica şi implementeaza respectivele standarde, în special principiul regionalizarii în cadrul teritoriului sau, şi în ceea ce priveşte cerinţele sanitare pe care le aplica importului din alte tari terţe sau din Comunitatea Europeană.

(4)Când se întocmeşte sau se modifica lista prevăzută la alin. (1) se va tine cont de:

a)statutul de sănătate al ecvideelor, al altor animale domestice şi sălbatice din ţara terta, în particular privind bolile animalelor exotice sau orice aspecte legate de sănătatea generală şi de mediu din ţara terta, care ar presupune un risc pentru statutul Comunităţii Europene privind sănătatea sau mediul;

b)legislaţia tarii terţe referitoare la sănătatea şi bunăstarea animalelor;

c)organizarea autorităţii veterinare competente şi a serviciilor sale de inspecţie, prerogativele acestor servicii, supravegherea care se aplică acestora şi mijloacele de care dispun, inclusiv capacitatea personalului şi a laboratoarelor, pentru a aplica legislaţia naţionala în mod eficient;

d)asigurările pe care autoritatea competentă veterinara a tarii terţe le poate da privind concordanta sau echivalenta cu condiţiile de sănătate animala din Comunitatea Europeană;

e)dacă ţara terta este membra a Oficiului Internaţional al Epizootiilor (OIE) şi dacă furnizează cu regularitate şi rapiditate informaţii privind existenta bolilor infectioase sau contagioase ale ecvideelor pe teritoriul sau, în particular acele boli catalogate de OIE şi prevăzute în anexa nr. 1;

f)garanţiile oferite de ţara terta de a informa direct Comisia Europeană şi statele membre:

(i)în decurs de 24 de ore de la confirmarea apariţiei bolii infectioase a ecvideelor, prevăzută în anexa nr. 1, sau a oricărei schimbări în programul de vaccinare referitor la astfel de boli;

(îi) în cel mai scurt timp de la orice schimbare propusă în regulile sanitare naţionale referitoare la ecvidee, în particular cele privind importul de ecvidee;

(iii)la intervale regulate, despre statusul de sănătate din teritoriu privind ecvideele;

g)toată experienta importurilor anterioare de ecvidee în viaţa din tari terţe şi de rezultatele oricăror controale efectuate la import;

h)rezultatele inspecţiilor şi/sau auditului comunitar efectuate în ţara terta, în particular de rezultatele evaluărilor autorităţilor competente sau, unde Comisia Europeană cere astfel, raportul emis de autorităţile competente privind inspecţiile pe care acestea le-au efectuat;

i)regulile privind prevenirea şi controlul bolilor infectioase sau contagioase ale animalelor, în vigoare în ţara terta, şi implementarea acestora, inclusiv regulile privind importul de ecvidee din alte tari terţe.

(5)Comisia Europeană va pune la dispoziţie publicului toate listele actualizate, întocmite şi modificate potrivit prevederilor alin. (1).

(6)Aceste liste pot fi combinate cu alte liste întocmite în scopul sănătăţii animalelor şi al celei publice şi pot, de asemenea, sa includă modele de certificate de sănătate.

(7)Condiţiile speciale de import pentru fiecare ţara terta sau grup de tari terţe, referitor la situaţia de sănătate animala a ecvideelor în ţara sau în ţările respective, trebuie stabilite în conformitate cu procedura comunitara.

(8)Reguli detaliate de aplicare a prezentului articol şi criteriile de includere a ţărilor terţe sau a unor părţi ale ţărilor terţe pe lista prevăzută la alin. (1) vor fi adoptate în conformitate cu procedura comunitara.

Articolul 13

(1)Ecvideele trebuie să provină din tari terţe:

a)indemne de pesta ecvina;

b)care au fost indemne pentru 2 ani de encefalomielita ecvina venezueleana (EEV);

c)care au fost indemne timp de 6 luni de durina şi morva.

(2)Comisia Europeană poate decide în conformitate cu procedura comunitara:

a)ca prevederile alin. (1) să se aplice numai unei părţi din teritoriul unei tari terţe.

În cazul în care cerinţele pentru pesta ecvina se aplică regional, trebuie să fie respectate cel puţin măsurile stabilite de art. 5 alin. (2) şi (3);

b)să solicite garanţii suplimentare pentru bolile neinregistrate în Comunitatea Europeană.

Articolul 14

Înainte de ziua încărcării pentru transportarea către statul membru de destinaţie, ecvideele trebuie să fi rămas fără întrerupere pe teritoriul sau într-o parte a teritoriului unei tari terţe ori, în cazul regionalizarii, în partea teritoriului definit conform art. 13 alin. (2) lit. a), pentru o perioadă ce va fi determinata în deciziile care vor fi adoptate conform art. 15. Ele trebuie să provină dintr-o exploatatie aflată sub supraveghere veterinara.

Articolul 15

(1)Importul ecvideelor de pe teritoriul unei tari terţe sau o parte a acestuia, definit în conformitate cu art. 13 alin. (2) lit. a), care figurează pe lista întocmită în concordanta cu art. 12 alin. (1), trebuie autorizat numai dacă ecvideele, pe lângă cerinţele art. 13:

a)se conformează cerinţelor de sănătate a animalelor adoptate, cu referire la specia în cauza şi la categoriile de ecvidee.

Baza de referinţa pentru stabilirea condiţiilor de sănătate a animalelor în concordanta cu prezentul alineat o constituie standardele stabilite la art. 4 şi 5;

b)în cazul unei tari terţe care nu este libera de stomatita veziculoasa sau de arterita virala de cel puţin 6 luni, ecvideele trebuie să respecte următoarele cerinţe:

(i)trebuie să provină dintr-o exploatatie care a fost indemna de stomatita veziculoasa de cel puţin 6 luni şi trebuie să fi reactionat negativ la un test serologic anterior expedierii;

(îi) în cazul arteritei virale, ecvideele masculi trebuie - fără a prejudicia art. 19 pct. (îi) - sa fi reactionat negativ la un test serologic, la un test de izolare a virusului sau la orice alt test recunoscut care să garanteze statutul de liber faţă de virus.

(2)Comisia Europeană poate defini, în conformitate cu procedura comunitara, categoriile de ecvidee masculi pentru care se aplică aceasta cerinţa.

Articolul 16

(1)Ecvideele trebuie identificate în conformitate cu art. 4 alin. (4) şi însoţite de un certificat întocmit de un medic veterinar oficial din ţara terta exportatoare. Acest certificat trebuie:

a)să fie emis în ziua încărcării animalelor pentru expediere către statul membru de destinaţie sau, în cazul căilor înregistraţi, în ultima zi lucrătoare dinaintea imbarcarii;

b)să fie întocmit în cel puţin una dintre limbile oficiale ale statelor membre de destinaţie şi în una dintre limbile oficiale ale statului membru în care se efectuează inspecţia de import;

c)să fie în original;

d)sa ateste ca animalele satisfac cerinţele prezentei norme sanitare veterinare şi cele stabilite conform prezentei norme sanitare veterinare cu privire la importul din tari terţe;

e)să fie constituit dintr-o singura fila;

f)să fie redactat pentru un singur destinatar sau, în cazul animalelor pentru tăiere, pentru un singur transport, cu condiţia ca animalele să fie marcate şi identificate corespunzător.

Autoritatea veterinara competenţa centrala a României va informa Comisia Europeană dacă va face uz de aceasta opţiune.

(2)Certificatul trebuie să fie redactat într-o formă care să fie conformă cu modelul stabilit în conformitate cu procedura comunitara.

Articolul 17

(1)Vor fi efectuate controale ad-hoc de experţii veterinari ai statelor membre şi ai Comisiei Europene pentru a verifica dacă prevederile prezentei norme sanitare veterinare, în special cele ale art. 12 alin. (2), sunt puse în aplicare.

(2)Dacă aceste controale efectuate în temeiul prezentului articol evidenţiază fapte grave ca cele la adresa unei exploataţii aprobate, Comisia Europeană va informa fără întârziere statele membre şi, în continuare, va adopta o decizie care să suspende temporar autorizarea.

(3)Experţii statelor membre care vor fi însărcinaţi cu aceste controale vor fi numiţi de către Comisia Europeană ca urmare a unei propuneri din partea statelor membre.

(4)Aceste controale se vor efectua în numele Uniunii Europene, care va suporta costul pentru cheltuielile implicate de acestea.

Articolul 18

(1)Imediat după sosirea în România, ca ţara de destinaţie, ecvideele pentru tăiere trebuie duse la un abator fie direct, fie după tranzitul printr-o piaţa ori un centru de colectare şi, în concordanta cu cerinţele de sănătate a animalelor, trebuie tăiate într-o perioadă de timp specificată în deciziile ce vor fi adoptate conform art. 15. (2) Fără a aduce atingere oricăror condiţii speciale ce pot fi adoptate în conformitate cu procedura comunitara, autoritatea veterinara centrala a României poate, din motive de sănătate a animalelor, sa desemneze abatorul la care trebuie duse aceste ecvidee.

Articolul 19

Comisia Europeană, actionand în conformitate cu procedura comunitara:

(i)poate decide ca importul dintr-o ţara terta sau dintr-o parte a unei tari terţe să fie limitat la specii sau categorii particulare;

(îi) va stabili, fără sa prejudicieze art. 15 din Directiva Consiliului 90/426/CEE , transpusa în legislaţia naţionala prin prezenta norma sanitară veterinara, condiţiile speciale pentru intrarea temporară pe teritoriul Comunităţii Europene a ecvideelor înregistrate sau a ecvideelor destinate utilizarilor speciale ori reintrarea lor pe teritoriul Comunităţii Europene după ce au fost exportate temporar;

(iii)va determina condiţiile de transformare a intrării temporare în intrare definitivă;

(iv)va desemna laboratorul naţional de referinţa pentru una sau mai multe boli ale ecvideelor prevăzute în anexa nr. 1 şi va stipula funcţiile, sarcinile şi procedurile privind colaborarea cu laboratoarele responsabile pentru diagnosticul bolilor infectioase ale ecvideelor din statele membre.

Capitolul IVPrevederi finale

Articolul 20

Anexele nr. 1-4 fac parte integrantă din prezenta norma sanitară veterinara.

Anexa 1

la norma sanitară veterinara

BOLI CU NOTIFICARE OBLIGATORIE

Următoarele boli trebuie notificate obligatoriu:

–durina;

–morva;

–encefalomielita ecvina (de toate tipurile, inclusiv EEV);

–anemie infectioasa;

–rabie;

–antrax;

–pesta ecvina;

–stomatita veziculoasa.

Anexa 2

la norma sanitară veterinara

INFORMAŢII DE SĂNĂTATE(a)

HEALTH INFORMATION(a)

Nr. pasaportului..................

Passport No. .....................

Subsemnatul, certific(b) ca animalul din specia ecvidee descris mai sus îndeplineşte următoarele cerinţe:

I, the undersigned, certify(b) that the equine animal described above meets the following requirements:

a)a fost examinat astăzi şi nu prezintă nici un semn clinic de boala;

a)it has been examined today and shows no clinical sign of disease;

b)nu este destinat tăierii în condiţiile unui program naţional de eradicare a unei boli infectioase sau contagioase;

b)it is not intended for slaughter under a naţional programme of contagious or infectious disease eradication;

c)nu provine dintr-un teritoriu sau parte a teritoriului unui stat membru sau tari terţe supuse unor restrictii din cauza pestei ecvine(c), c) - it does not come from the territory or a part of the territory of a Member State or third country which is the subject of restrictions for reasons of African horse sickness(c)

sau

or

–provine dintr-un teritoriu sau parte a teritoriului unui stat membru care a fost supus interdicţiei din motive de sănătate a animalelor şi a fost supus, cu rezultate satisfăcătoare, testelor prevăzute la art. 5 (3) al Directivei Consiliului 90/426/CEE , în statia de carantina a ............... între ........... şi .............(c)

–it comes from the territory or part of the territory of a Member State which was subject to prohibition for animal health reasons and has undergone, with satisfactory results, the tests provided for în Article 5(3) of Directive 90/426/EEC în the quarantine station of .................. between ................. and .........(c);

(a) Aceasta informaţie nu este solicitată atunci când exista un acord bilateral în concordanta cu art. 6 al Directivei Consiliului 90/426/CEE .

(a) This information is not required where there is a bilateral agreement în accordance with Article 6 of Directive 90/426/EEC

(b) Valid pentru 10 zile.

(b) Valid for 10 days.

–nu este vaccinat împotriva pestei ecvine, sau a fost vaccinat împotriva pestei ecvine la ..............(c)(d);

–it is not vaccinated against African horse sickness, or it was vaccinated against African horse sickness on ..............(c)(d);

d)nu provine dintr-o exploatatie care a fost supusă interdicţiei din motive de sănătate a animalelor şi nici nu a avut contact cu ecvidee provenite dintr-o exploatatie care a fost supusă interdicţiei din motive de sănătate animala:

d)it has not come from a holding which was subject to prohibition for animal health reasons nor had contact with equidae from a holding which was subject to prohibition for animal health reasons:

–timp de şase luni în cazul ecvideelor suspecte de a fi contractat durina, începând cu data ultimului contact efectiv sau posibil cu un animal bolnav. Totuşi, în cazul unui armasar, interdicţia se va aplica până când animalul este castrat.

–during six months în the case of equidae suspected of having contracted dourine, beginning on the date of the last actual or possible contact with a sick animal. However, în the case of a stallion, the prohibition shafi apply until the animal is castrated,

–timp de şase luni în cazul morvei sau encefalomielitei ecvine, începând cu ziua în care ecvideele ce suferă de boala în cauza sunt tăiate,

–during six months în the case of glanders or equine encephalomyelitis, beginning on the day on which the equidae suffering from the disease în question are slaughtered,

–în cazul anemiei infectioase până la data la care, animalele infectate au fost tăiate iar cele rămase au prezentat reactie negativa la cele doua teste Coggins efectuate la interval de trei luni,

–în the case of infectious anaemia, until the date on which, the infected animals having been slaughtered, the remaining animals have shown a negative reaction to two Coggins tests carried out three months apart,

–timp de şase luni de la ultimul caz, în cazul stomatitei veziculoase,

–during six months from the last case, în the case of vesicular stomatitis,

–timp de o luna de la ultimul caz, în cazul rabiei,

–during one month from the last case, în the case of rabies,

–timp de 15 zile de la ultimul caz, în cazul antraxului,

–during 15 days from the last case, în the case of anthrax,

–dacă toate animalele din speciile sensibile la boala situate în exploatatie au fost tăiate, iar incinta dezinfectata în cursul a 30 de zile, începând cu ziua în care animalele au fost distruse şi incinta a fost dezinfectata, exceptând cazul antraxului, când perioada de interdicţie este de 15 zile;

–if all the animals of species susceptible to the disease located on the holding have been slaughtered and the premises disinfected during 30 days, beginning on the day on which the animals were destroyed and the premises disinfected, except în the case of anthrax, where the period of prohibition is 15 days;

(c) A se şterge orice nu se aplică.

(c) Delete whichever does not apply

(d) Data vaccinarii trebuie înscrisă în pasaport.

(d) The vaccination date must be entered în the passport.

e)din cunoştinţele mele, nu a venit în contact cu ecvidee suferind de o boala infectioasa sau contagioasa, în cele 15 zile precedente acestei declaraţii;

e)to the best of my knowiedge, it has not been în contact with equidae suffering from an infectious or contagious disease în the 15 days prior to this declaration.

f)în momentul inspecţiei a fost corespunzător pentru a fi transportat pe traseul stabilit în concordanta cu prevederile Directivei Consiliului 91/628/CEE (e) f) at the time of inspecţion it was fit to be transported on the intended journey în accordance with the provisions of Directive 91/628/CEE (e).

(e) Aceasta declaraţie nu-i scuteşte pe transportatori de obligaţiile lor în concordanta cu prevederile comunitare în vigoare ce se referă, în particular, la starea animalelor ce urmează să fie transportate.

(e) This statement does not exempt transporters from their obligations în accordance with Community provisions în force în particular regarding the fitness of animals to be transported.

Anexa 3

la norma sanitară veterinara

MODEL

MODEL

CERTIFICAT DE SAMATATE

HEALTH CERTIFICATE

pentru comerţul dintre statele membre ale Uniunii Europene

for trade between Member States of the EEC

ECVIDEE

EQUIDAE

Nr.: ..........

No.: ..........

Statul membru de expediere: ..................................

Member State of dispatch: ....................................

Ministerul responsabil: .....................................

Ministry responsible: .......................................

Departamentul teritorial responsabil: ........................

Territorial Department responsible: ..........................

I. Număr de ecvidee: .........................................

I. Number of equidae: ........................................

II. Identificarea ecvideelor: ................................

II. Identification of equidae: ...............................

III. Originea şi destinaţia animalului/animalelor:

III. Origin and destination of animal/s:

Animalul/animalele trebuie trimis(e)

The animal/s is/are to be sent

dela: ........................................................

(Locul de export)

from: ........................................................

(Place of export)

la: ..........................................................

(statul membru şi locul de destinaţie)

to: ..........................................................

(Member State and place of destination)

Numele şi adresa expeditorului: ..............................

..............................................................

Name and adress of consignor: ................................

..............................................................

Numele şi adresa destinatarului: .............................

..............................................................

Name and adress of consignee: ................................

..............................................................

IV. Informaţii despre sănătate(a)

IV. Health information(a)

Subsemnatul, certific ca animalul(ele) descris(e) mai sus îndeplineşte/îndeplinesc următoarele cerinţe:

I,the undersigned, certify that the animal/s described above meet/s the following requirements:

1.a(au) fost examinat(e) astăzi şi nu a(u) prezentat nici un semn clinic de boala;

1.it/they has/have been examined today and show/s no clinical sign of disease;

2.nu este/sunt destinat(e) tăierii în baza unui program naţional de eradicare a bolii contagioase sau infectioase;

2.it/they is/are not intended for slaughter under a naţional programme of contagious or infectious disease eradication;

3.- nu provin(e) din teritoriul sau partea teritoriului unui stat membru sau a unei tari terţe care este supusă restrictiilor din cauza pestei ecvine,

3.- it/they come/s from the territory or part of the territory of a Member State or a third country which is the subject of restrictions for reasons of African horse sickness,

sau

or

–provin(e) din teritoriul sau partea teritoriului unui stat membru care a fost supus restrictiilor din cauza pestei ecvine şi a(u) fost supus(e), cu rezultate satisfăcătoare, testelor prevăzute la art. 5 alin. (3) al Directivei Consiliului 90/426/CEE în statia de carantina şi(b);

(a) Aceasta informaţie nu este cerută dacă exista un acord bilateral în concordanta cu art. 6 al Directivei Consiliului 90/426/CEE .

(a) This Infomnation is not required where there is a bilateral agreement în acoordance with article 6 of Directive 90/426/EEC .

–it/they come/s from the territory of a Member State which was the subject of restrictions for reasons of African horse sickness and has/have undergone, with satisfactory results, the test provided for în Article 5 (3) of Directive 90/426/CEE în the quarantine station of between and(b);

–nu este/sunt vaccinate împotriva pestei ecvine,

–it/they is/are not vaccinated against African horse sickness,

sau

or

–a(u) fost vaccinat(e)împotriva pestei ecvine(b);

–it/they was/were vaccinated against African horse sickness on(b);

4.nu provin(e) dintr-o exploatatie care a fost supusă interdicţiei din motive de sănătate a animalelor şi nici nu a(u) avut contact cu ecvidee dintr-o exploatatie care a fost supusă interdicţiei din motive de sănătate a animalelor:

4.it/they has/have not come from a holding which was subject to prohibition for animal health reasons nor had contact with equidae from a holding which was subject to prohibition for animal health reasons:

–timp de şase luni în cazul ecvideelor suspecte de a fi contractat durina, începând cu data ultimului contact efectiv sau posibil cu un animal bolnav. Totuşi, în cazul unui armasar, interdicţia se va aplica până când animalul este castrat,

–during six months în the case of equidae suspected of having contracted dourine, beginning on the date of the last actual or possible contact with a sick animal. However, în the case of a stallion, the prohibition shall apply until the animal is castrated,

–timp de şase luni în caz de morva sau encefalomielita ecvina, începând cu ziua în care ecvideele ce suferă de boala în cauza sunt tăiate,

–during six months în the case of glanders or equine encephalomyelitis, beginning on the day on which the equidae suffering from the disease în question are slaughtered,

–în cazul anemiei infectioase, până la data în care animalele infectate care au fost tăiate, animalele rămase au prezentat o reactie negativa la cele doua teste Coggins efectuate la interval de trei luni,

–în the case of infectious anaemia, until the date on which, the infected animals having been slaughtered, the remaining animals have shown a negative reaction to two Coggins tests carried out three months apart,

–timp de şase luni de la ultimul caz, în cazul stomatitei veziculoase,

–during six months from the last case, în the case of vesicular stomatitis,

–timp de o luna de la ultimul caz, în cazul rabiei,

–during one month from the last case, în the case of rabies,

–timp de 15 zile de la ultimul caz, în cazul antraxului,

–during 15 days from the last case, în the case of anthrax,

(b) Se şterge orice nu se aplică.

(b) Delete whichever does not apply.

–dacă toate animalele din speciile sensibile la boala, situate în exploatatie au fost tăiate iar incinta a fost dezinfectata timp de 30 de zile, începând cu ziua în care animalele au fost distruse şi incinta dezinfectata, cu excepţia antraxului, când perioada de interdicţie este de 15 zile;

–if all the animals of species susceptible to the disease located on the holding have been slaughtered and the premises desinfected during 30 days, beginning on the day on which the animals were destroyed and the premises desinfected, except în the case of anthrax, where the period of prohibition is 15 days;

5.din cunoştinţele mele, nu a(u) venit în contact cu ecvideele ce suferă de o boala infectioasa sau contagioasa în cele 15 zile dinaintea acestei declaraţii.

5.to the best of my knowledge, it/they has/have not been în contact with equidae suffering from an infectious or contagious disease în the 15 days prior to this declaration.

6.în momentul inspecţiei a(u) fost corespunzător (corespunzătoare) pentru a fi transportate pe traseul stabilit în concordanta cu prevederile Directivei Consiliului 91/628/CEE (d)

6.at the time of inspecţion it/they was/were fit to be transported on the intended journey în accordance with the provisions of Directive 91/628/EEC (d)

V. Prezentul certificat este valabil 10 zile.

V. This certificate is valid for 10 days.

Întocmit ........... data .............

Done at ........., date ...............

...............................

(Ştampila) (semnatura medicului veterinar)

Stamp (signature of the official veterinarian)

..............................................

(Numele cu majuscule şi calitatea medicului veterinar)(c)

(Name în capital letters and capacity of signing veterinarian)(c)

(c) În Germania "Beamteter Tierarzt"; în Belgia "Inspecteur veterinaire" sau "Inspecteur Dierenarts"; În Franţa "Veterinaire officiel"; în Italia "Veterinario ufficiale"; în Luxembourg "Inspecteur veterinaire"; în Olanda "Officieel Dierenarts"; în Danemarca "Embeds Dyriaege"; în Irlanda "Veterinary inspector; în Marea Britanie "Veterinary inspector"; în Grecia "Episimos ktiniatros"; în Spania "Inspector Veterinario"; şi în Portugalia "Inspector Veterinyrio"; în Austria "Amtstierarzi"; Finlanda: "kutmanelainliiakari ou kaupunginetiintaakari ou laaninelainlaakarl/kommunaheierinar ou stadaveterinar ou tinsveterinar; Suedia: "Iansvelerinar, distriklsveleriniir ou grarmvetetinar"; în Cehia: "veterinarni inspektor"; în Estonia: "veterinaarjarelevalve ametnik"; în Cipru; "(*)"; în Letonia: "vaterinarais inspektors"; în Lituania: "veterinarijos Inspektorius"; în Ungaria: "hatosagi allatorvos"; în Malta: "veterinarju ufficjali"; în Polonia: "urzedowy lekarz weterynarii"; în Slovenia: "veterinarski inspeklor"; în Slovacia: "veterinarny inspektor".

(c) În Germany "Beamleter Tierarzi; în Belgium "Inspecteur veterinaire" or "Inspecteur Dierenarts"; în France "Veterinaire officiel"; în Italy "Veterinario ufficiale"; în Luxembourg "Inspecteur veterinaire"; în the Netherlands "Officieel Dierenarts"; în Denmark "Embeds Dyriaege"; în Irelaod "Veterinary inspector"; în United Kingdom "Veterinary inspector"; în Greece "Episimos ktiniatros"; În Spain "Inspector Veterinario"; and în Portugal "Inspector Velerinyrio"; Auriche "Amtstierarzi; Finlande: "kutmanelainliakari ou kaupunginetiintaakari ou laaninelainlaakari/kommunaheierinar ou stadaveterinar ou tinsveterinar; Suede: "Iansveterinar, distriklsveleriniir ou gramnvetetinar; în the Czech Republic: "veterinarni inspektor"; în Estonia: "veterinaarjarelavalve ametnik"; În Cyprus: "(*)"; în Latvia: "veterinarais inspektors"; în Lithyania: "veterinarijos inspektorius"; în Hungary: "hatosagi allatorvos"; în Malta: "veterinariu ufficjall"; în Poland: "urzedowy lekerz weterynarii": în Slovenia: "veterinarski inspektor; în Slovakia: "veterinarny inspektor".

(d) Aceasta declaraţie nu îi scuteşte pe transportatori de obligaţiile acestora în conformitate cu prevederile comunitare în vigoare, în special cele privitoare la condiţia fizica a animalelor ce urmează a fi transportate.

(d) This statement does not extempt transporters from their obligations în accordance with Community provisions în force în particular regarding the fitness of animals to be transported.

(*) limba elena

Anexa 4

la norma sanitară veterinara

PESTA ECVINA

DIAGNOSTIC

Reactivii pentru tehnicile imunoabsorbante inlantuite enzimatic (ELISA) descrise mai jos pot fi obţinuţi de la Laboratorul de Referinţa al Comunităţii Europene sau de la Laboratoarele de Referinţa ale 0IE pentru pesta ecvina.

1.TEST ELISA DE COMPETIŢIE PENTRU DETECTAREA PREZETEI ANTICORPILOR IMPOTRIVA VIRUSULUI PESTEI ECVINE (VPE) (TEST PRESCRIS)

Testul ELISA de competiţie este folosit pentru a detecta anticorpi specifici VPE în ser provenind de la oricare din speciile de ecvidee. Antiserul de cobai contra VPE (denumit în continuare antiser de cobai) este un antiser cu spectru larg, policlonal şi imun, specific serogrupului şi permite detectarea tuturor serotipurilor cunoscute de virus ale acestei maladii.

Principiul testului este întreruperea reacţiei între antigenul VPE şi antiserul de cobai de către o proba de ser de testat. Anticorpii de VPE din proba de ser de testat vor fi în competiţie cu aceia din antiserul de cobai, rezultând o reducere a culorii asteptate (după adăugarea anticorpilor anti-cobai marcati enzimatic şi a substratului). Serul poate fi testat la o singura dilutie de 1/5 (metoda testului punctual) sau poate fi titrat (metoda titrarii serului) pentru a determina valorile finale ale dilutiei. Valorile de inhibitie mai mari de 50% pot fi considerate ca fiind pozitive.

Protocolul testului descris mai sus este folosit în Laboratorul de Referinţa Regional pentru Pesta Ecvina, Pirbright, Marea Britanie.

1.1.Procedura de testare

1.1.1.Pregătirea placilor

1.1.1.1.Se acoperă plăcile pentru ELISA cu antigen VPE extras din culturile celulare infectate şi diluat în soluţie tampon carbonata/bicarbonata, la un pH de 9,6. Plăcile de ELISA se incubeaza peste noapte la 4°C.

1.1.1.2.Se spala plăcile de trei ori prin inundarea şi golirea godeurilor cu soluţie salina fosfata tamponata (SSFT), cu pH de la 7,2 la 7,4, şi se usucă pe hârtie adsorbanta.

1.1.2.Godeuri de control

1.1.2.1.Se titreaza serul pozitiv de control într-o serie de dilutie dubla, de la 1/5 ia 1/640, de-a lungul coloanei 1 în soluţia tampon de blocare (SFT care conţine 0,05 % (v/v) Tween-20, 5,0 % (w/v) lapte praf smantanit (Cadbury's Marvel^TM)şi 1,0 % (v/v) ser de la bovine adulte) pentru a reieşi un volum total de 50 f2æl/godeu.

1.1.2.2.Se adauga 50 æl din serul negativ de control, la o dilutie de 1/5 (10 æl de ser + 40 æl de soluţie tampon de blocare) în godeurile A şi B ale coloanei 2.

1.1.2.3.Se adauga 100 f2æl/godeu din soluţia tampon de blocare, în godeurile C şi D ale coloanei 2 (goale).

1.1.2.4.Se adauga 50 f2æl din soluţia tampon de blocare în godeurile E, F, G şi H ale coloanei 2 (cu ser de cobai de control).

1.1.3.Metoda testului punctual

1.1.3.1.Se adauga câte o dilutie 1/5 din fiecare ser de testat în soluţia tampon de blocare, în godeurile corespunzătoare din coloanele de la 3 la 12 (10/f2æl ser + 40 æl de soluţie tampon de blocare);

sau

1.1.4.Metoda de titrare a serului

1.1.4.1.Se prepara o serie dubla de dilutie pentru fiecare proba de testat (de la 1/5 la 1/640) în soluţie tampon de blocare, în 8 godeuri ale coloanelor solitare de la 3 la 12.

apoi

1.1.5.Se adauga 50 f2æl de antiser de cobai, prediluat în soluţie tampon de blocare, în toate godeurile placii pentru ELISA, exceptându-le pe cele goale (toate godeurile conţin acum un volum final de 100 f2æl).

1.1.5.1.Se incubeaza timp de o ora la 37 °C pe un agitator orbital.

1.1.5.2.Plăcile se spala de trei ori şi se usucă ca mai sus.

1.1.5.3.Se adauga 50 f2æl de ser de iepure anti-cobai conjugat cu peroxidaza din hrean, diluat în prealabil în soluţie tampon de blocare, în fiecare godeu.

1.1.5.4.Se incubeaza timp de o ora la 37 °C pe un agitator orbital.

1.1.5.5.Plăcile se spala de trei ori şi se usucă ca mai sus.

1.1.6.Cromogen

Se prepara soluţia de cromogen OFD (orto-fenildiamina) conform instrucţiunilor producătorului (0,4 mg/ml în apa distilata sterila), exact înainte de utilizare. Se adauga substratul (peroxid de hidrogen H(2)O(2)) pentru a rezultă o concentraţie finala de 0,05 % (v/v) (1/2000 dintr-o soluţie de H(2)O(2) %). Se adauga 50 f2æl de soluţie OFD în fiecare godeu şi se lasă plăcile pe banca timp de 10 minute la temperatura camerei. Se opreşte reactia prin adăugarea de 50 f2æl/godeu de acid sulfuric [H(2)SO(4)] 1 M.

1.1.7.Citirea

Se citesc spectrofotometric la 492 nm.

1.2.Exprimarea rezultatelor

1.2.1.Utilizând un computer, se determina valorile densitatatii optice (DO), şi procentul de inhibitie (PI) pentru serul de testat şi cel de control pe baza valorii medii înregistrate în cele 4 godeuri de control cu ser de cobai. Datele exprimate ca valori DO şi PI sunt utilizate pentru a se determina dacă testul s-a efectuat în limite acceptabile. Limitele superioare de control (LSC) şi limitele inferioare de control (LIC) pentru serul de cobai de control se situeaza între valorile 1,4 şi respectiv 0,4 ale DO. Titrul punctului final pentru controlul pozitiv bazat pe un PI de 50 % trebuie să fie de 1/240 (în limitele cuprinse între 1/240 şi 1/480). Orice placa ce nu se conformează criteriilor de mai sus trebuie respinsă. Totuşi, dacă titrul serului pozitiv de control este mai mare de 1/480 iar probele de testat sunt tot negative, atunci probele de testat negative pot fi acceptate.

Godeurile duplicat cu seruri negative de control şi godeurile duplicat goale trebuie să înregistreze valori ale PI între +25 % şi -25 %, şi respectiv între +95% şi +105 %. Neincadrarea în aceste limite nu face placa să fie nevalida dar sugereaza ca se dezvolta culoarea de fond.

1.2.2.Pragul de diagnostic (valoarea finala) pentru serul de testat este de 50 % (PI 50 %). Probele care înregistrează valori ale PI mai mari de 50 % sunt înregistrate drept pozitive. Probele care înregistrează valori ale PI mai mici de 50 % sunt înregistrate ca negative.

Probele care înregistrează valori ale PI peste şi sub pragul pentru godeurile duplicat sunt considerate a fi neconcludente. Astfel de probe pot fi retestate prin testul punctual sau prin titrare. Probele pozitive pot de asemenea să fie titrate pentru a furniza o indicare a gradului de pozitivare.

Testul punctual

Serul pentru testat

2.TESTUL ELISA INDIRECT PENTRU DETECTAREA ANTICORPILOR IMPOTRIVA VIRUSULUI PESTEI ECVINE (AVPE) (TEST PRESCRIS)

Testul descris mai jos este în concordanta cu descrierea testului de la capitolul 2.1.11 al Manualului de Standarde pentru Testele de Diagnostic şi Vaccinuri al OIE, editia a patra, 2000.

Proteina recombinata VP7 a fost utilizata ca antigen pentru determinarea anticorpilor împotriva VPE, având un mare indice de sensibilitate şi specificitate. Alt avantaj este faptul ca este stabil şi nu este infectant.

2.1.Procedura de testare

2.1.1.Faza solida

2.1.1.1.Plăcile de ELISA sunt acoperite cu AVPE-4 VP7 diluati în soluţie tampon carbonata/bicarbonata cu pH de 9,6. Plăcile se incubeaza peste noapte la temperatura de 4°C.

2.1.1.2.Plăcile se spala de cinci ori cu apa distilata care conţine 0,01 % (v/v) Tween 20 (soluţie de spalare). Plăcile se tamponeaza uşor cu material absorbant pentru a îndepărta reziduurile de la spalare.

2.1.1.3.Plăcile se blocheaza cu soluţie salina fosfata tamponata (SSFT) + 5 % (w/v) lapte smantanit (lapte praf smantanit Nestle^TM), 200 f2æl/godeu, timp de o ora, la 37°C.

2.1.1.4.Se indeparteaza soluţia de blocare şi se tamponeaza uşor plăcile cu un material absorbant.

2.1.2.Probele de testat

2.1.2.1.Probele de ser ce urmează a fi testate şi serul de control pozitiv şi negativ, sunt diluate 1/25 în SSFT + 5 % (w/v) lapte smantanit + 0,05 % (v/v) Tween 20, câte 100 f2æl pe godeu. Se incubeaza timp de o ora la 37°C.

2.1.2.2.Se spala plăcile asa cum este descris la punctul 2.1.1.2.

2.1.3.Conjugatul

2.1.3.1.Se disperseaza câte 100 f2æl pe godeu de gama-globuline anti-cal conjugate cu peroxidaza din hrean, diluate în SFT + 5 % lapte + 0,05 % Tween 20, la un pH de 7,2. Se incubeaza o ora la 37°C.

2.1.3.2.Se spala plăcile asa cum este descris la punctul 2.1.1.2.

2.1.4.Cromogen/Substrat

2.1.4.1.Se adauga 200 f2æl pe godeu de soluţie de cromogen/ substrat (10 ml de soluţie de 80,6 mM de DMAB (dimetil amino benzaldehida) + 10 ml de soluţie 1.56 mM de MBTHC (3-metil-2-benzo-tiazolina hidrazona clorhidrat) + 5 f2æl H(2)0(2)).

Dezvoltarea culorii este oprită prin adăugarea a 50 f2æl H(2)SO(4) 3N după aproximativ 5-10 minute (înainte ca testul negativ de control sa înceapă să se coloreze).

Alţi cromogeni, ca ABTS (2,2'-azino-bis-[3-etilbenzotiazolina-6-acid sulfonic]), TMB (tetrametil benzidina), sau OFD (orto-fenildiamina) pot fi de asemenea utilizate.

2.1.4.2.Plăcile se citesc la 600 nm (sau 620 nm).

2.2.Interpretarea rezultatelor

2.2.1.Valoarea finala se calculează adaugand 0,6 la valoarea testului de control negativ (0,6 este valoarea standard de deviatie derivata cu un grup de 30 de probe de ser negative).

2.2.2.Probele de testat care dau valori ale absorbtiei mai mici decât valorile finale sunt considerate ca negative.

2.2.3.Probele de testat care dau valori ale absorbtiei mai mari decât valorile finale +0,15 sunt considerate ca fiind pozitive.

2.2.4.Probele de testat care dau valori intermediare ale absorbtiei sunt neconcludente şi trebuie aplicată o a doua tehnica pentru a confirma rezultatele.

3.TESTUL ELISA DE BLOCARE PENTRU DETECTAREA ANTICORPILOR IMPOTRIVA VIRUSULUI PESTEI ECVINE (AVPE) (TEST PRESCRIS)

Testul ELISA de blocare este destinat detectarii anticorpilor AVPE specifici din serul speciilor susceptibile. VP7 este proteina virala antigenica majoră a VPE şi este conservată în cadrul a 9 serotipuri. Datorită faptului ca anticorpul monoclonal (Acm) este de asemenea directionat împotriva lui VP7, proba va avea un înalt nivel de sensibilitate şi specificitate. Mai departe, antigenul VP7 recombinat este total inofensiv şi de aceea este garantat un grad mare de siguranţă.

Principiul testului este întreruperea reacţiei dintre antigenul recombinat VP7, ca antigen legat de placa pentru ELISA, şi Acm conjugat, rezultând o reducere a culorii.

Testul descris în continuare este efectuat în cadrul Laboratorului European de Referinţa pentru Pesta Ecvina din Algete, Spania.

3.1.Procedura de testare

3.1.1.Plăcile pentru ELISA

3.1.1.1.Se acoperă plăcile pentru ELISA cu AVPE-4 VP7 recombinat, diluat în soluţie tampon carbonata/ bicarbonata, cu pH de 9,6. Se incubeaza peste noapte la 4°C.

3.1.1.2.Plăcile se spala de cinci ori cu soluţie salina fosfata tamponata (SSFT) care conţine 0,05 % (v/v) Tween 20 (SSFTT).

3.1.1.3.Placa se stabilizeaza prin tratare cu o soluţie stabilizatoare (pentru a permite stocarea pe termen lung la temperatura de 4°C fără pierderea activităţii) şi se usucă pe material adsorbant.

3.1.2.Probele de testat şi controale

3.1.2.1.Pentru verificare:

–se dilueaza 1/10 serurile de testat şi cele de control în SFTT, direct pe placa, pentru a se obţine un volum final de 100 f2æl/godeu. Se incubeaza o ora la 37°C.

3.1.2.2.Pentru titrare:

–se prepara o serie dubla de dilutie din serurile de testat şi testele de control pozitive (100 f2æl/godeu) de la 1/10 la 1/280 în 8 godeuri. Probele de control negative sunt testate la o dilutie de 1/10.

3.1.3.Conjugatul

Se adauga Acm (anticorp monoclonal specific pentru VP7) conjugat cu peroxidaza din hrean, prediluat, câte 50 f2æl/godeu în fiecare godeu şi se amesteca uşor pentru a asigura omogenizarea. Se incubeaza timp de 30 de minute la 37°C.

3.1.4.Se spala plăcile de cinci ori cu SSFTT şi se usucă asa cum a fost descris mai sus.

3.1.5.Cromogen/ Substrat

Se adauga câte 100 f2æl/godeu de soluţie de cromogen/ substrat (1 ml ABTS (2,2'-azino-bis-[3-etilbenzotiazolina-6-acid sulfonic])5 mg/ml + 9 ml de soluţie tampon de substrat (soluţie tampon de fosfat-citrat 0,1 M cu pH de 4, care conţine H(2)O(2) 0,03 %] şi se incubeaza timp de 10 minute la temperatura camerei. Dezvoltarea culorii este oprită prin adăugarea a 100 f2æl/godeu de SDS 2 % (Sulfat dodecil de sodiu).

3.1.6.Citirea

Se Citesc la 405 nm la un cititor pentru ELISA.

3.2.Interpretarea rezultatelor

3.2.1.Validarea probelor

Testul este valid atunci când densitatea optica (DO) a testului de control negativ (TCN) este mai mare de 1,0 şi DO a testului de control pozitiv (TCP) este mai mica de 0,2.

3.2.2.Calcularea valorii finale

Valoare finala pozitiva = TCN - ((TCN -TCP)x 0,3)

Valoare finala negativa = TCN - ((TCN -TCP)x 0,2),

unde TCN este DO a testului de control negativ, iar TCP este DO a testului de control pozitiv.

3.2.3.Interpretarea rezultatelor

Probele cu DO mai mica decât valoarea finala pozitiva trebuie să fie considerate drept pozitive pentru anticorpii VPE.

Probele cu DO mai mica decât valoarea finala negativa trebuie să fie considerate drept negative pentru anticorpii VPE.

Probele cu DO situata între aceste doua valori trebuie să fie considerate neconcludente şi să fie recoltate iar probe de la animale după doua sau trei săptămâni.